тРНК синтезуються звичайною РНК-полімеразою у разі прокаріотів та РНК-полімеразою III у разі еукаріотів. Транскрипти генів тРНК піддаються багатостадійному процесингу, що зрештою призводить до формування типової для тРНК просторової структури.

Транспортні РНК (їх 20 видів) утворюються у ядрі на ДНК, потім переходять у цитоплазму. Вони мають найкоротші молекули з 80–100 нуклеотидів з кодовим триплетом на одному кінці та «посадковим майданчиком» на іншому. Їх функція – транспортування амінокислот до рибосом, де йде збирання білкової. молекули.

Відомо, що все види РНК синтезуються на ДНК-матриці. Фрагмент молекули ДНК, на якій синтезується ділянка центральної петлі тРНК, має наступну послідовність нуклеотидів (верхній ланцюг смисловий, нижній транскрибується).

тРНК – відносно невеликі молекули, довжина їх кіл варіює від 74 до 95 нуклеотидних залишків. Всі тРНК мають однаковий 3'-кінець, побудований з двох залишків цитозину та одного – аденозину (CCA-кінець). Саме 3'-кінцевий аденозин зв'язується з амінокислотним залишком при утворенні аміноацил-тРНК.